Development of a reverse-transcription loop-mediated isothermal amplification assay to detect avian influenza viruses in clinical specimens

In recent years, the avian influenza has brought not only serious economic loss to the poultry industry in China but also a serious threat to human health because of the avian influenza virus(AIV) gene recombination and reassortment. Until now, traditional RT-PCR, fluorescence RT-PCR and virus isolation identification have been developed and utilized to detect AIV, but these methods require high-level instruments and experimental conditions, not suitable for the rapid detection in field and farms. In order to develop a rapid, sensitive and practical method to detect and identify AIV subtypes, 4 specific primers to the conserved region of AIV M gene were designed and a loop-mediated isothermal amplification(RT-LAMP) method was established. Using this method, the M gene of H1–H16 subtypes of AIV were amplified in 30 min with a water bath and all 16 H subtypes of AIV were able to be visually identified in presence of fluorescein, without cross reaction with other susceptible avian viruses. In addition, the detection limit of the common H1, H5, H7, and H9 AIV subtypes with the RT-LAMP method was 0.1 PFU(plaque-forming unit), which was 10 times more sensitive than that using the routine RT-PCR. Further comparative tests found that the positivity rate of RT-LAMP on detecting clinical samples was 4.18%(14/335) comparing with 3.58%(12/335) from real-time RT-PCR. All these results suggested that the RT-LAMP method can specifically detect and identify AIV with high sensitivity and can be considered as a fast, convenient and practical method for the clinic test and epidemiological investigation of AIV.     

浓戊二醛防冻消毒剂的防冻及消杀效果

为考察添加防冻剂(乙二醇)的浓戊二醛消毒剂防冻及消杀效果,对不同温度条件下添加不同量防冻剂的浓戊二醛消毒剂(防冻剂/浓戊二醛消毒剂体积分数分别为2%、3%、4%、8%、10%、12%、14%)进行了冻结试验,并对其抑菌及杀灭非洲猪瘟病毒效果进行了验证,利用硫酸滴定法检测防冻剂对浓戊二醛有效含量及稳定性的影响。结果显示:添加不同量防冻剂的浓戊二醛消毒剂在-10、-20℃条件下均有良好的防冻效果。添加防冻剂后的消毒液(体积分数10%、12%)进行100倍稀释后抑菌圈可达到标准要求,且抑菌圈平均大于不加防冻剂消毒液1 mm左右。5%稀释、12%体积分数的防冻消毒剂,在20℃条件下作用10 min,10℃作用30 min,0℃作用60 min,均能完全灭活非洲猪瘟病毒;10%稀释的防冻消毒剂-10℃条件下作用30 min,20%稀释的防冻消毒剂-20℃条件下作用30 min,均能完全灭活非洲猪瘟病毒。经硫酸滴定,该防冻剂理化性质稳定,首次检定与24、48 h后检定的结果并无太大差距,消毒剂有效含量分别为96.7%、96.2%和95.6%。结果表明,低温环境下添加体积分数12%的防冻消毒剂具有很好的防冻效果和贮存稳定性,并且能够有效杀灭细菌及非洲猪瘟病毒。本研究为东北地区冬季选择合适的防冻消毒剂提供了技术支撑。     

非洲猪瘟常态化下如何让猪场的"发电机"——母猪持久"发电"

2020年初,突如其来的新冠肺炎疫情打破了人们对鼠年新年的喜悦,全国人民齐心协力共抗新冠病毒,向世界展现了什么叫中国力量!但对于养猪业来说,在非洲猪瘟还没有被彻底消灭的时候,新冠病毒的侵袭,对于生猪生产无疑是雪上加霜。自2018年8月我国报道发生非洲猪瘟疫情以来,几乎所有省、市、自治区的养猪企业均被疫情所笼罩,生猪存栏量大幅度下降,养猪业遭到了近乎毁灭性的打击。根据官方公布的数据得知,当前非洲猪瘟疫情的防控形势依旧十分严峻。而母猪作为猪场的"发电机",其培育到生产的这一过程要更加重视起来。猪场若能做好以下几点,可有助于母猪多生多活,提高猪场盈利。     

三元母猪留做繁殖母猪的问题探讨及建议

三元母猪做繁殖母猪是现下一种很无奈又很普遍的现象,但由于母猪没有经过专业的选育及科学的饲喂,往往产仔后问题很多,最常见的问题表现在新生仔猪腹泻,这种腹泻多是因为三元母猪在生长的过程中没有添加脱霉剂,导致霉菌毒素中毒,霉菌毒素破坏了仔猪的肝脏及免疫系统,导致新生仔猪对乳脂利用率差以及自身免疫力低下的双重原因引起腹泻。文章针对仔猪的腹泻情况做详细阐述及针对三元母猪留做繁殖母猪给出一些相应的建议。     

含稻秸蔬菜育苗基质块成型工艺参数优化

为了确定黄瓜育苗块成型的最优工艺参数,以育苗基质和水稻秸秆的混合物为原料,育苗块的抗破坏强度和尺寸稳定性为成型质量检测指标,采用四元二次回归通用旋转组合试验设计结合响应面法,探讨了原料含水率、压力、秸秆长度和秸秆含量对育苗块成型的影响,建立了黄瓜育苗块成型特性参数与各因素之间的回归模型.综合分析表明,各因素对育苗块抗破坏强度的影响主次顺序为:压力＞秸秆长度＞含水率=秸秆含量,在交互作用中,含水率与秸秆含量、压力与秸秆长度、秸秆长度与秸秆含量对育苗块抗破坏强度的影响显著(P＜0.05);各因素对育苗块尺寸稳定性的影响主次顺序为:秸秆含量＞含水率＞压力＞秸秆长度,含水率与秸秆长度的交互作用对育苗块尺寸稳定性的影响较显著(P＜0.05).利用Design-Expert8.0.6软件得出理论最优工艺参数,并考虑试验的可操作性,对理论最优工艺参数进行调整及试验验证,得到最优工艺参数:含水率为21％,压力为4.5 kN,秸秆长度为10mm,秸秆质量分数为12％,该组合条件下的育苗块抗破坏强度为23.03 N,尺寸稳定性为82.83％.分析表明,优化后育苗块的理化特性符合黄瓜育苗的农艺要求.该研究可为黄瓜育苗块成型机工艺参数优化提供理论和实践依据.     

垄台修复中耕施肥机的设计

针对东北垄作区保护性耕作由于缺乏相应的玉米中耕机具,出现秸秆覆盖地无法中耕的问题,设计了垄台修复中耕施肥机.该机利用旋耕碎秆装置在垄沟旋转作业,进行碎秆、除草,并将旋起的土分散在垄沟两侧,同时地轮驱动施肥,垄台修复轮进行镇压修垄、盖肥.田间试验结果表明,该机器防堵性能好,垄台修复和施肥效果均达到设计要求,符合东北垄作区秸秆覆盖地的使用要求.